Он сын актрисы Хильдегард Шмаль, режиссера Нильса-Питера Рудольфа. Он живет и работает в Гамбурге.
После окончания актерского обучения в Гамбурге в 1989 году он получил первые роли в начале 1990-х годов в комедии Манта и в военной драме Сталинград. С тех пор он снялся более чем 35 фильмах. Рудольф регулярно появлялся в таких сериалах, как Tatort, Doppelte Einsatz, Wolffs Revier, Der Alte и Schloßhotel Orth. Он сыграл Рудольфа Аугштейна в фильме Die Spiegel, ARD, который был показан весной 2014 года.
Себастьян играл в Базельском театре, Берлинский ансамбль, Шаубюне в Берлине, Volksbühne Berlin, Schauspielhaus Hamburg, Schauspielhaus Zürich, Kampnagel в Гамбурге и Бургтеатр в Вене. Он работал с такими режиссерами, как Люк Бонди, Шорш Камерун, Кристоф Марталер, Стефан Пучер, Фальк Рихтер, Кристоф Шлингенсиф и Роберт Уилсон., Себастьян Рудольф является постоянным участником театра Талия в Гамбурге с сезона 2009/2010. Его роли включают Фауста I + II, режиссера Николаса Стемана, который был приглашен на Берлинскую театральную встречу 2012 года и был выбран для постановки 2012 года. С сезона 2019/2020 Себастьян Рудольф был членом ансамбля в Schauspielhaus Zurich. За то, что он сыграл роль Фауста I + II, Рудольф был признан Актером года 2012 по результатам ежегодного опроса критиков журнала « Театр сегодня».